巴尔的摩-俄亥俄铁路博物馆（Baltimore & Ohio Railroad Museum），简称B&O铁路博物馆，是一座位于马里兰州巴尔的摩市的博物馆，展示了美国最古老、最著名的铁路公司之一——巴尔的摩-俄亥俄铁路公司（B&O Railroad）的历史和文化。该博物馆于1953年开放，占地40英亩，是全美最大的铁路博物馆之一。B&O铁路博物馆的收藏展品包括历史悠久的铁路车辆、文物、档案和艺术品等，其中最为著名的是收藏有美国历史上首辆商业化运营的蒸汽机车——“汤姆·索耶号”（Tom Thumb）。此外，博物馆还有一个模型铁路馆和一个儿童馆，为游客提供了更加深入了解铁路历史和文化的机会。每年夏季，博物馆还会举办“铁路嘉年华”（Railroad Festival）等活动，吸引了大量游客前来参观和体验。B&O铁路博物馆被誉为美国铁路文化和历史的宝库，值得铁路爱好者和历史爱好者前来一探究竟。